Zellkulturmedium ist die Nährstoffgrundlage, um die in vivo-Wachstumsumgebung tierischer Zellen künstlich zu imitieren und das Überleben und die Proliferation von Zellen in vitro aufrechtzuerhalten. ein Nährstoff. Was sind also die häufigsten Probleme bei der Verwendung von Zellkulturmedien? Machen wir eine Analyse.
1. Auswahl des Puffersystems und pH-Änderung des Zellkulturmediums
Da der optimale pH-Wert für die meisten Zellen zwischen 7,0 und 7,4 liegt, können Abweichungen von diesem Bereich schädliche Auswirkungen auf das Zellwachstum haben. Die pH-Anforderungen verschiedener Zellen sind jedoch nicht genau gleich. Primär kultivierte Zellen haben im Allgemeinen eine schlechte Toleranz gegenüber pH-Schwankungen, während unendliche Zelllinien eine starke Toleranz haben. Daher ist in der Primärkultur das Puffersystem im Kulturmedium wichtiger. Das allgemeine Zellkulturmedium verwendet ein ausgewogenes Salzsystem, aber unterschiedliche Kulturmedien oder die gleiche Reihe von Kulturmedien verwenden unterschiedliche ausgewogene Salzsysteme. Zum Beispiel haben die 199-Serien und die MEM-Serien alle das Hanks-Systemkulturmedium und die Earle-Systemkultur. Base. Einige Medien sind nicht das oben erwähnte herkömmliche ausgewogene Salzsystem, wie RPMI1640-Medium, F12-Medium. Das ausgewogene Salzsystem des MEM-Mediums mit niedrigem Serumgehalt ist auch kein herkömmliches ausgewogenes Salzsystem, und die Pufferkapazität des ausgewogenen Salzsystems ist stärker als die des herkömmlichen ausgewogenen Salzsystems.
Zellkultur
Es gibt viele Gründe für den pH-Abfall während der Zellkultur. Wenn die Zellen sehr schnell wachsen, fällt der pH-Wert normalerweise schnell ab, was durch rechtzeitige Passage, Erhöhung des Passageverhältnisses oder Verringerung des Serumvolumens behoben werden kann. Auch ein zu fest angezogener Verschluss der Kulturflasche, eine unzureichende Pufferkapazität des NaHCO3-Puffersystems, eine falsche Salzkonzentration im Nährmedium, Bakterien-, Hefe- oder Pilzbefall können ebenfalls dazu führen, dass der pH-Wert oft schnell absinkt. Zu diesem Zeitpunkt können Sie es auf folgende Weise lösen:
1) Erhöhen Sie die NaHCO3-Konzentration im Kulturmedium oder verringern Sie die CO2-Konzentration im Inkubator. Wenn der NaHCO3-Gehalt zwischen 2,0 g/L und 3,7 g/L liegt, beträgt die entsprechende CO2-Konzentration 5~10 Prozent;
2) Wechsel zu einem CO2--unabhängigen Kulturmedium;
3) Lösen Sie den Flaschenverschluss richtig. Fügen Sie dem Kulturmedium HEPES-Puffer hinzu, um die Endkonzentration 10-25 mM herzustellen;
4) Verwenden Sie die auf Earle's Salz basierende Kulturlösung in der CO2-Kulturumgebung und verwenden Sie die durch Hanks' Salz hergestellte Kulturlösung in der atmosphärischen Kulturumgebung;
5) Kultur verwerfen oder mit Antibiotika sterilisieren, wenn Kontamination die Ursache ist.
2. Mehrere wichtige Zusatzstoffe werden üblicherweise in Zellkulturmedien verwendet und Probleme, auf die beim Verwendungsprozess geachtet werden sollte
Phenolrot wird als Indikator für den pH-Wert in Zellkulturmedien verwendet. Im Allgemeinen kann der pH-Wert des Mediums anhand der Indikatorwirkung von Phenolrot beurteilt werden, aber der Gehalt an Phenolrot in serumarmem oder serumfreiem Zellkulturmedium unterscheidet sich von dem in gewöhnlichem Zellkulturmedium und kann nicht beobachtet werden mit bloßem Auge oder Der pH-Wert wird empirisch bestimmt, und es wird empfohlen, zur Messung ein pH-Meter zu verwenden. Phenolrot hat normalerweise keinen signifikanten Einfluss auf die Qualität biologischer Produkte, die in serumhaltigen Zellkulturmedien hergestellt werden, und kann auch durch Reinigungstechniken entfernt werden, aber Phenolrot kann ein intrazelluläres Natrium-/Kalium-Ungleichgewicht in serumfreien Zellkulturmedien verursachen , die das Zellwachstum beeinflussen.
Zellkulturplatte
Natriumbicarbonat wird hauptsächlich als Puffersystem in Zellkulturmedien verwendet und wirkt auch osmotisch druckregulierend. Üblicherweise handelt es sich bei der in der Gebrauchsanweisung des Produkts empfohlenen Menge an Natriumbicarbonat um eine übliche und unbedenkliche Menge, die auf Grundlage praktischer Erfahrungen auf wissenschaftlicher Grundlage ermittelt wird. Aufgrund unterschiedlicher Zelllinien (Stämme) kann sich dieselbe Zelle jedoch an unterschiedliche Umgebungen anpassen (unterschiedliche Zelltoleranz usw.), und es gibt regionale Unterschiede in der Wasserqualität usw., die auch in der tatsächlichen Produktion leicht verändert werden können Prozess, sondern die Verwendung von Personen, die die entsprechenden Tests durchführen müssen (physikochemische und Zellproduktionstests usw.).
HEPES ist ein nichtionischer Puffer mit guter Pufferkapazität im pH-Bereich von 7,2 bis 7,4 und kann in hohen Konzentrationen für einige Zellen toxisch sein. HEPES-Puffer kann mit geringen Mengen an Natriumcarbonat (0,34 g/l) verwendet werden, um den Anstieg des osmotischen Drucks auszugleichen, der durch die Zugabe von zusätzlichem HEPES verursacht wird. Sein sicherer Konzentrationsbereich liegt zwischen 10 und 25 mmol/l.
Natriumpyruvat kann als alternative Kohlenstoffquelle in der Zellkultur verwendet werden, und obwohl Zellen Glucose als Kohlenstoffquelle bevorzugen, können Zellen Natriumpyruvat auch in Abwesenheit von Glucose metabolisieren.
Glutamin ist in Lösung sehr instabil. Es kann bei 4 Grad für 1 Woche zu 50 Prozent abgebaut werden. Es ist am besten, es für den Gebrauch separat zuzubereiten, in einem Kühlschrank mit -20 Grad aufzubewahren und vor dem Gebrauch dem Zellkulturmedium hinzuzufügen.
