Einige Tipps für die Zellkultur im Labor

Unsere Operationsmethoden, Details und theoretischen Erklärungen werden zu Richtlinien für Ihre Operation, wie z. B. die Platzierung von Nährlösungen und Zellflaschen; Sterilisationsverfahren; Um ihre korrekte Bedienung zu erlernen, ist es notwendig, sie beim ersten Mal zu beachten.

Zellen pflegen wie Kinder großziehen

Zellen sind wirklich zerbrechlich. Es ist am besten, es jeden Tag zu überprüfen, um ungewöhnliche Phänomene wie Wassermangel, Kohlendioxid, Stromausfall und unzureichende Temperatur im Inkubator zu vermeiden. Es ist auch notwendig, diese Unfälle rechtzeitig zu lösen, um größere Schmerzen zu vermeiden, die durch wiederholte Experimente verursacht werden. .

Gute Zellen sollten rechtzeitig ausgesät werden

Die Zellen werden chargenweise passagiert, so dass selbst dann, wenn eine Charge ausfällt, eine Reserve vorhanden ist. Es mag für den Durchschnittsmenschen wie Letzteren nicht einfach sein. Aber das ist die Lehre meines Blutes. Sobald die Zellen kontaminiert waren, wurde die gesamte Armee ausgelöscht. Damals bedauere ich, dass ich den Samen nicht geschützt habe.

Jede Zelle hat ihre eigenen Eigenschaften und sollte anders behandelt werden.

Zellen sind die gleichen wie Menschen, und verschiedene Zellen haben unterschiedliche Kultureigenschaften. Seien Sie vorsichtig im Kultivierungsprozess. Unterschiedliche Zelllinien verwenden unterschiedliche Medien und Seren.

Zum Beispiel sind die glatten Muskelzellen, die ich aufziehe, sehr aktiv und mögen es lebhaft. In 2-3 Tagen wird es eine große Bevölkerung geben und ich esse und trinke nicht sehr gerne. Es ist wirklich das beste Kind, das man großziehen kann. Endothelzellen und glatte Muskelzellen haben ähnliche Persönlichkeiten, aber sie sind sehr unhygienisch und schlampig. Sie enthalten viele sekretorische Zellen, daher müssen sie häufig gewechselt und gewaschen werden. Die RAW264.7-Zellen sind auch sehr fröhlich und sehr essbar. Es ist notwendig, sie oft zu füttern. Das Problem ist, dass die Zellen leicht aktiviert werden. Es ist gut, dass die Flasche und die Umgebung, in der sie kultiviert werden, frei von Endotoxinen sind, aber es ist schwierig für mich als Mutter, sie zufrieden zu stellen.

Arbeitsvorbereitung vor der Ausbildung

Einschließlich der Handhabung von Verbrauchsmaterialien, der Konfiguration von Reagenzien, Sterilitätstests usw.

Reinigung von Glaswaren. Bei Glaswaren (Küvettenfläschchen, Fläschchen mit Nährlösung, Penicillinfläschchen etc.) erst mit Waschpulver reinigen (auf tote Ecken achten) und dann spülen. Für mehr als 24 Stunden in Säurelösung einweichen, dann 10 Mal mit sauberem Wasser spülen, um restliche Säurelösung zu entfernen. Flaschen etc. werden beim Spülen kräftig geschüttelt. Dann 24 h in doppelt destilliertem Wasser eingeweicht. Nach dem Trocknen einpacken und 2 Stunden bei 160 Grad trocknen.

Reagenzkonfiguration. Als Flüssigkeit für die Zellkultur kann im Allgemeinen mehr als doppelt destilliertes Wasser verwendet werden. Und achten Sie auf die Einstellung des pH-Wertes.

Sterilitätsprüfung. Verwenden Sie hauptsächlich Filtersterilisation: wie Trypsin, Antibiotika, G-418-Lösung, verschiedene Medien, Natriumpyruvat, Glutamin usw. Einige können autoklaviert werden: PBS, D-Hank's usw.

Reagenzien werden in Aliquots gelagert

Inklusive Nährlösung, Pankreatin, Serum etc.

Serum ist besonders wichtig. Serum muss bei -20 Grad gelagert werden. Wenn eine Flasche auf einmal nicht aufgebraucht werden kann, können 40-50 ml in sterile, mit Säure behandelte Flaschen abgefüllt oder sogar in Penicillinflaschen aufbewahrt werden. Im Allgemeinen ist das vom Hersteller bereitgestellte Serum steril und erfordert keine Sterilfiltration. Wenn viel Schwebstoffe im Serum gefunden werden, kann das Serum dem Medium zugesetzt und zusammen filtriert werden, und das Serum sollte nicht direkt filtriert werden. (Unter normalen Umständen keine Auswirkung auf die Zellkultur)

Das abgefüllte Serum muss nach und nach aufgetaut werden: 4 Grad Kühlschrank wird vollständig aufgelöst und dann in Verpackungen aufgeteilt. Während des Auflösungsprozesses muss es regelmäßig geschüttelt werden (achten Sie darauf, dass keine Luftblasen entstehen), um die Temperatur und Zusammensetzung zu vereinheitlichen und das Auftreten von Ausfällungen zu verringern. Tauen Sie nicht direkt von –20 Grad auf 37 Grad auf, da sich die Temperatur zu stark ändert, was leicht zu Proteingerinnung und -ausfällung führen kann.

Hitzeinaktivierung bezieht sich auf das Erhitzen des vollständig aufgetauten Serums bei 56 Grad für 30 Minuten. Nachdem das Wasserbad auf 56 Grad angestiegen ist, geben Sie das Serum hinein, warten Sie, bis die Temperatur auf 56 Grad angestiegen ist, und zählen Sie die Zeit. Schütteln Sie es im Allgemeinen etwa alle 5 Minuten gleichmäßig. Der Zweck dieser Wärmebehandlung besteht darin, die Komplementkomponenten im Serum zu deaktivieren. Sofern nicht erforderlich, wird diese Wärmebehandlung im Allgemeinen nicht durchgeführt, da sie eine signifikante Zunahme des Sediments verursacht und die Qualität des Serums beeinträchtigt. Achten Sie auf die Auswirkung eines Serumwechsels (auch unterschiedlicher Chargen) auf die Zellen.

Starkes Gefühl der Sterilität

Vor dem Experiment wurde die ultrareine Werkbank 30 Minuten lang durch Bestrahlung mit UV-Licht sterilisiert, die Oberfläche des aseptischen Betriebs wurde mit 70-prozentigem Ethanol abgewischt und der Ventilator der ultrareinen Werkbank wurde einige Minuten lang eingeschaltet, bevor der Versuchsbetrieb gestartet wurde .

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