Das Zellkulturmedium muss ausreichend Nährstoffe enthalten, um die für biochemische Reaktionen wie die Zellneusynthese und den Zellstoffwechsel erforderlichen Substanzen und Energie bereitzustellen. Die Hauptbestandteile des Zellkulturmediums sind Wasser, Aminosäuren, Vitamine, Kohlenhydrate, anorganische Salze und andere Hilfsnährstoffe. Daher müssen wir bei täglichen Experimenten auf die Sterilisationsmethode des Zellkulturmediums und die damit verbundenen Vorsichtsmaßnahmen achten.
Zellkultur
1. Sterilisationsmethoden und Vorsichtsmaßnahmen für verschiedene Zellkulturmedien
Sterilisationsverfahren für Zellkulturmedien werden in Autoklavensterilisation und Membranfiltrationssterilisation unterteilt. Unterschiedliche Kulturmedien können aufgrund ihrer unterschiedlichen Nährstoffe unterschiedliche Sterilisationsmethoden haben.
Autoklav
Einige Medien, wie MEM, können autoklaviert werden, diese Medien enthalten im Allgemeinen kein L-Glutamin und Natriumbicarbonat und werden im Allgemeinen hinzugefügt, nachdem die Medien autoklaviert wurden. Außerdem kann statt L-Glutamin auch Hochdruckglutamat (zB L-Alanyl-L-Glutamin) verwendet werden. Das autoklavierbare Medium wird mit minimalem Nährstoffverlust bei 121 Grad, 15 psi und 15 Minuten ohne Verlängerung der Sterilisationszeit vollständig sterilisiert.
Die meisten Zellkulturmedien sind nicht zum Autoklavieren geeignet. Da das Kulturmedium häufig Vitamine, Proteine, Polypeptide, Wachstumsfaktoren und andere Substanzen enthält, neigen diese Substanzen bei hoher Temperatur oder Strahleneinwirkung zur Denaturierung oder zum Funktionsverlust, sodass die oben genannten Flüssigkeiten meist gefiltert und sterilisiert werden, um Bakterien zu entfernen. Es stehen viele Filtermembranen zur Filtration und Sterilisation zur Verfügung, und ihre Materialien sind hauptsächlich PES, Nylon, Polycarbonat, Celluloseacetat, Nitrocellulose, PTFE, Keramik usw. Die Membranfiltrationssterilisation ist derzeit eine häufig verwendete und bequeme Methode. Filtermembranen mit einer Porengröße von 0,2 μm werden häufig verwendet, und einige verwenden eine Porengröße von 0,1 μm. Im Vergleich zur Hochdruckfiltration haben Membranen eine längere Lebensdauer und sind teurer, aber weniger schädlich für die Nährstoffe im Zellkulturmedium.
2. Vorsichtsmaßnahmen während der Lagerung verschiedener Zellkulturmedien
Im Allgemeinen sollte flüssiges Zellkulturmedium nicht bei -20 Grad eingefroren werden, da beim Auftauen Nährstoffe ausfallen können, die den Kultureffekt beeinträchtigen. Unter normalen Umständen sollte es bei 2 ~ 8 Grad vor Licht geschützt gelagert werden. Nehmen Sie es vor Gebrauch aus dem Kühlschrank und stellen Sie es zur Äquilibrierung auf Raumtemperatur. Das übliche Flüssigmedium ist 6 bis 12 Monate gültig. Versuchen Sie, eine langfristige Lagerung von flüssigem Zellkulturmedium zu vermeiden. Das darin enthaltene Glutamin wird sich mit der Verlängerung der Lagerzeit langsam zersetzen. Wenn das Zellwachstum nicht gut ist, können Sie den Glutamingehalt im Medium testen, um festzustellen, ob Glutamin hinzugefügt werden sollte. . Kommerziell erhältliches flüssiges Zellkulturmedium hat ein bestimmtes Verfallsdatum. Nach der Verwendung von Trockenpulver-Zellkulturmedium zur Herstellung von Flüssigkeit sollte es auch bei niedriger Temperatur (2 ~ 8 Grad) gelagert werden. Neben dem leichten Abbau von Glutamin im Medium können auch andere Komponenten im Medium mit steigender Temperatur abgebaut oder ausgefällt werden.